顯微鏡下觀察細(xì)胞吹打更容易成功的經(jīng)驗(yàn)
方法一:
1.用力不能太猛,要均勻吹打;
2.按順序從上到下,從右到左,每個(gè)地方都吹到。
3.盡量不要吹起泡沫,有少量問(wèn)題也不大。
4.吹打的次數(shù)有時(shí)候與胰酶有關(guān)系。我們一般是冷胰酶消化0.5-1min(A549,2BS,HepG2都試過(guò)了),15-20次也夠了。
過(guò)度吹打會(huì)損害細(xì)胞,會(huì)影響培養(yǎng)基的pH值...,但是,如果不充分吹打,消化后細(xì)胞還是有好多貼在壁上
在75ml培養(yǎng)瓶的不同部分吹打,總共15次,然后在解剖顯微鏡下觀察,細(xì)胞99%吹打下來(lái)了,狀態(tài)也不錯(cuò)。
方法二:
用預(yù)熱胰酶加入1ml,然后倒掉0.5ml左右,再等待2min左右就可以了,大約吹打15次就OK
其實(shí)帖壁生長(zhǎng)細(xì)胞消化傳代并不是借助吹打的力量才使細(xì)胞離壁,關(guān)鍵是消化。
消化要到位,然后棄掉胰酶,加培養(yǎng)基,搖晃培養(yǎng)瓶,使細(xì)胞借助培養(yǎng)液打擊的力量脫落。
然后用槍吹幾次培養(yǎng)液,把仍沒(méi)有成單個(gè)的細(xì)胞吹成單個(gè)。
我覺(jué)得這樣對(duì)細(xì)胞損傷很小。
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