熒光顯微鏡實(shí)驗(yàn)總結(jié)
用哪種固定方法 一般認(rèn)為有兩種：冷acetone和4％PFA
我兩種都用過，感覺用4%PFA做前固定過夜后糖脫水效果是更好的，但是有點(diǎn)費(fèi)時(shí)費(fèi)力，經(jīng)過比較，用冷acetone做后固定 5分鐘4攝氏度的效果也說得過去，也很方便省時(shí)。比較推薦！
blocking solution的配制和時(shí)間 我用的是5%serum 1％BSA 0.05%Tween PBS 室溫染色盒內(nèi)1個(gè)小時(shí)，如果不放心可以兩個(gè)小時(shí)，但是一旦blocking了就要注意不能讓切片干燥，所以個(gè)人認(rèn)為一個(gè)小時(shí)應(yīng)該夠用了。(serum注意是和二抗同一種屬）
blocking solution的使用量 我用的是每一張100μl
切忌保持濕度 染色開始后切忌不能讓片子干燥了，一旦干燥了就會很糟糕，我也在這個(gè)地方吃了很多虧。。。
一抗的名稱 使用濃度 染色時(shí)間 保持濕度 遮光否
二抗的名稱 使用濃度 染色時(shí)間 保持濕度 遮光否
洗凈方法 一抗之后我一般洗三次 5分鐘換一次PBS 4攝氏度
二抗之后我一般洗四次 5分鐘換一次PBS 4攝氏度
＃封片劑干燥時(shí)間 最好是30分鐘以上，干燥后馬上觀察效果公認(rèn)是更好的
＃熒光顯微鏡的使用 建議一定要跟著老師，前輩，多觀摩幾次之后再自己動手
簡單羅列了幾個(gè)個(gè)人認(rèn)為需要提前做好提綱的關(guān)鍵詞
剛開始做的時(shí)候有挺多困難的
慢慢摸索也許會比較辛苦
但是一旦量變到質(zhì)變之后再加上反復(fù)回頭看反復(fù)總結(jié)經(jīng)驗(yàn)，就會有提高
最后附上一張剛做的感覺還算清楚的大腸炎模型的切片中
colonic patch的部位， DC和Tcell 聚集的地方應(yīng)該是在antigen presenting
藍(lán)色 上皮細(xì)胞
綠色 DC
紅色 T cell
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華東華南地區(qū)
