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落射熒光顯微鏡植物細(xì)菌細(xì)胞進(jìn)行熒光測定分析

落射熒光顯微鏡能夠?qū)闹参锝M織回收的大量的細(xì)菌細(xì)胞進(jìn)行
熒光測定分析，廣泛用于對細(xì)菌基因表達(dá)的頻率分布進(jìn)行分析。

一種在共聚焦激光顯微鏡下對葉子上細(xì)菌GFP熒光進(jìn)行原位測定的
方法。該方法是在葉片表面上進(jìn)行熒光原位雜交，首先用多聚甲醛
固定葉片，然后用低濃度瓊脂薄膜覆蓋，以避免雜交過程對細(xì)菌細(xì)
胞空間分布的破壞。接著透過瓊脂膜用共聚焦顯微鏡觀察標(biāo)記16Sr
RNA的 E. herbicola細(xì)胞，測定細(xì)胞的GFP報(bào)道融合蛋白的轉(zhuǎn)錄活
性通過這種方法可以測定某一特定細(xì)菌群落中基因表達(dá)的空間分布
模式。
熒光蛋白DsRed的發(fā)現(xiàn)引起了人們的極大關(guān)注，因?yàn)樵诨虮?br /> 達(dá)研究中DsRed有潛力與GFP一起形成轉(zhuǎn)錄融合而作為一種細(xì)菌的內(nèi)
在標(biāo)記來應(yīng)用。盡管有研究報(bào)告稱在單細(xì)胞中GFP和DsRed能夠被同
時激發(fā)，但是在熒光共振能量轉(zhuǎn)移(FRET)成像中DsRed也是一個良
好的受體分子(以GFP或CFP為供體)。這些熒光蛋白質(zhì)之間的相互作
用會干擾對熒光信號的定量分析，因此，用DsRed和GFP或其變種進(jìn)
行雙重標(biāo)記的適用性還需要作進(jìn)一步研究