光學顯微鏡分辨率,干燥系物鏡數(shù)值孔徑通常小于1光學和電子顯微技術(shù)光學顯微鏡分辨率膠體質(zhì)點由于線度太小而不能直接用顯微鏡觀察.光學顯微鏡的分辨率:即兩個物象能分別清楚地辨別而不混為一體的最小距離)主要受照明光波長的限制.光學顯微鏡的干燥物鏡數(shù)值孔徑通常小于1.油鏡頭在光波波長為600nm時,其數(shù)值孔徑可達1.5,這時分辨率的極限為200nm(1.2μm)’左右.由于人眼能容易地區(qū)分兩個相距約0.2mm(200μm)的物體,所以,即使用構(gòu)造良好的、放大率超過1000倍的光學顯微鏡也沒有什么好處.因為放大更多的倍數(shù)只能增加圖象的大小而不增加其清晰度 由于其數(shù)值孔徑較大,光學顯微鏡的焦深相對較淺(當放大100倍時,其值約為lO微米當放大1000倍時,其值約為1微米),然而這并不總是一個技術(shù)上的缺點.例如在微電泳時,這種淺焦深能使我們觀察到電泳池中位置確鑿、形象清晰的質(zhì)點 除了分辨能力的問題以外,某物體的能見度述受物體與其墑圍背景間之光學對比度的限制. 在研究膠體體系時,對于克服光學顯微鏡的能力限制,特別有應用價值的兩種技術(shù)是電子顯微技術(shù)和暗場顯微技術(shù).前者的分辨極限大大提高,后者觀察所需之最小對比度則大為降低. 透射電子顯微鏡 為了增加顯微鏡的分辨能力,以便直接觀察膠體(和更小的)‘物質(zhì),所用輻射光的波長應大大低于可見光的波長.現(xiàn)在已能產(chǎn)生波長為0.01nm的電子光束,它可用電場或磁場聚焦,其作用與透鏡相當.電子顯微鏡的分辨率所受到螅限制,與其說是來自于輻射波長方面,不如說是來自于穩(wěn)定高壓電源和矯正透鏡象差的技術(shù)困難方面.因此,目前只能用數(shù)值孔徑小于0.01的透鏡.借助于電子計算機以消去“噪聲黟后,分辨率可達0.2nm,此數(shù)值與原子的線度相近.盡管分辨率高,單個原子由于其位置的快速波動,看起來仍然是模糊的. 為觀察表面結(jié)構(gòu),更好的方法是使用復制型技術(shù).方法之一是將樣品沉積到一個剛剛剝開的云母表面上,再用真空蒸發(fā)鍍上碳膜(或所需的一種重金屬),將樣品包埋住,然后置于水面上.待薄膜離開云母,再用適當?shù)娜軇┤苋ベ|(zhì)點后,將所形成的復制品裝在銅網(wǎng)上,即可供觀察之用.
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