DNA電子顯微鏡技術的應用,精細菌體科研光學儀器DNA的電子顯微鏡觀察 與一般的手段不同,DNA的電子顯微鏡檢查是一種簡單、迅速而又可靠的技術。由于可以對單個分子進行觀察,并且所有的分子都可以觀察到,所以,它能很好地補充凝膠電泳技術的不足。在凝膠電泳中,看到的是長度相同的一群分子。電鏡除了可用于DNA的一般觀察以外,還可進行異源雙鏈的檢查,從而確定非同源區(qū)的位置。原理用水樣法和醋酸鈾染色法觀察DNA。這是一項非??焖俚姆椒?,當需要用定性的方法確定一個DNA樣品的分子大小或結構拓樸學時非常有用。第二部分將集中討論異源雙鏈的形成以及用甲酰胺法觀察異源雙鏈。起初,可用噬菌體進行異源雙鏈分析。后來,可以對實驗過程中產生的缺失進行定位。實驗步驟 1.演示檢查電子顯微鏡。 2.按照實驗方法二十七,在電鏡下觀察用水樣法制備的DNA樣品。DNA應事先準備好。 3.按照實驗方法二十八在電鏡下觀察用甲酰胺法制備的DNA樣品。用于異源雙鏈分析的噬菌體原液應事先準備好。 4.用更好的銅網樣品,攝下異源雙鏈的圖像。 5.對感興趣的噬菌體進行電子顯微鏡異源雙鏈分析這是一個可靠的方法,但是需要較長的離心時間。污染的DNA、RNA和某些蛋白質在16小時之內不會達到平衡,它們會分布于整個梯度。這種方法的優(yōu)點是,噬菌體在一個遠沒有上述方法所用的那樣陡的梯度中即可到達平衡密度。如果噬菌體制備物是不均一的,即噬菌體含有的DNA大小不同,結果所觀察到的噬菌體帶就會不只一條。 觀察·個微弱噬菌體帶的最好方法是,用一條來自于顯微鏡光源的平行光,從離心管的上部照射下來。在離心管的r背面放一個平的黑色背景也有利于觀察。
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