細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)運(yùn)輸系統(tǒng)研究用顯微鏡出售!
(一) 利用免疫染色法,了解細(xì)胞內(nèi)胞器分布的情形:
主要的原理是利用抗原和抗體之間有專(zhuān)一的結(jié)合特性,以及已知的標(biāo)定分子,利用顯微鏡觀察蛋白質(zhì)所在的位置。例如,Hochest 33258這種會(huì)與DNA結(jié)合的螢光物質(zhì),受激發(fā)后,發(fā)出藍(lán)光,因此可用來(lái)指示細(xì)胞核所在的位置。而Golgin-245這種已被研究出是位在高基氏體的蛋白質(zhì),它可以利用專(zhuān)一性的一級(jí)抗體辨識(shí)后,再以會(huì)激發(fā)出螢光的二級(jí)抗體結(jié)合,則由螢光訊號(hào)處得知高基氏體所在的位置。
(二) 探討蛋白質(zhì)在細(xì)胞內(nèi)的分布情形:
蛋白質(zhì)執(zhí)行生物功能時(shí),如外釋作用,必須經(jīng)由蛋白質(zhì)運(yùn)輸系統(tǒng),將它送到特定的細(xì)胞部位,而外來(lái)的大分子也可經(jīng)由內(nèi)胞作用(請(qǐng)見(jiàn)附圖三)進(jìn)入細(xì)胞。例如,以螢光標(biāo)定的霍亂毒素次單元B (Cholera Toxin subunit-B;CTB-594nm) 和運(yùn)鐵蛋白質(zhì) (Transferrin;Tf-488nm),各標(biāo)定30分鐘后,見(jiàn)其被送至高基氏體處,了解細(xì)胞外的分子是透過(guò)內(nèi)胞作用由細(xì)胞膜運(yùn)送至高基氏體。并利用VSVG-GFP這種病毒醣蛋白質(zhì)與綠色螢光蛋白質(zhì)結(jié)合的分子,在細(xì)胞內(nèi)合成后,會(huì)經(jīng)由內(nèi)質(zhì)網(wǎng)運(yùn)送至高基氏體,再運(yùn)送至細(xì)胞膜,藉此了解外釋作用。
(三) 觀察蛋白質(zhì)運(yùn)輸路徑的調(diào)節(jié):
使用一種會(huì)調(diào)控囊泡運(yùn)輸?shù)奶厥獾鞍踪|(zhì)分子ARL1﹝它是一種小分子GTP結(jié)合蛋白酶,ADP-ribosylation factor-like蛋白質(zhì)(簡(jiǎn)稱ARL)﹞,來(lái)觀察ARL1對(duì)于VSVG-GFP以及CT-B運(yùn)輸過(guò)程的調(diào)節(jié)作用。例如,若以細(xì)胞轉(zhuǎn)染的方法,讓細(xì)胞同時(shí)大量表現(xiàn)出ARL1 突變株 (ARL1QL)、VSVG-GFP,則會(huì)使VSVG-GFP無(wú)法順利送至細(xì)胞膜上,而堆積在高基氏體內(nèi)。
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