研究過程與方法
實驗首先利用免疫染色法了解細胞內(nèi)胞器的分布情形。免疫染色是利用抗原及抗體之間的專一結(jié)合特性，使抗體跟抗原結(jié)合，若將螢光物質(zhì)標定在抗體上，即可以利用螢光顯微鏡觀察抗原所在的位置。配合其他已知的標定分子（如DNA位在細胞核，Golgin-245蛋白質(zhì)位在高基氏體）我們可順利觀察實驗中蛋白質(zhì)所在的胞器位置，探討蛋白質(zhì)在細胞內(nèi)的運輸情形。
實驗是以螢光標定的霍亂毒素次單元B（CTB-594nm）及運鐵蛋白質(zhì)（Tf-488nm），了解細胞外的分子是透過內(nèi)胞作用由細胞膜運送到高基氏體。此二種蛋白質(zhì)的不同之處是運鐵蛋白質(zhì)的胞飲作用需透過包涵素外衣囊袋（clathrin）的三角架結(jié)構(gòu)運送，而霍亂毒素次單元則大都不需透過包涵素外衣囊袋運送。實驗過程中，直接加入螢光標定的霍亂毒素次單元B及運鐵蛋白質(zhì)，皆會受細胞自動胞飲進入細胞，我們只需控制蛋白質(zhì)運輸過程的時間即可觀察到這些蛋白質(zhì)會被運送到所預(yù)期的標的地（例如：endosome、Golgi、ER）。
實驗是利用細胞轉(zhuǎn)染的方法，將外源基因送至細胞中，使細胞表現(xiàn)該基因。常用的細胞轉(zhuǎn)染法有【磷酸鈣】、【電穿孔法】、【脂小體】和【顯微注射】等。此次實驗是以脂小體為媒介將ARL1的突變株ARL1QL及VSVG-GFP轉(zhuǎn)染到細胞內(nèi)。將VSVG-GFP質(zhì)體轉(zhuǎn)至細胞內(nèi)則該外生性VSVG-GFP會運送至高基氏體后，再運送到細胞膜，因此透過VSVG-GFP這種毒蛋白質(zhì)可以了解外釋作用。而我們同時送入的是一種會參與調(diào)控囊泡運輸?shù)奶厥獾鞍踪|(zhì)分子ARL1QL，觀察ARL1QL對于VSVG-GFP運輸過程的調(diào)節(jié)作用。
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