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顯微鏡活體成像實驗的總結(jié)
總結(jié)：熒光信號發(fā)射波長越大，成像儀越靈敏，操作手法越成熟，可以探測到的組織器官越深。
體內(nèi)成像 兩個關(guān)鍵因素：信號源、探測器（活體成像儀，包括探頭和激發(fā)光）
一、假如是轉(zhuǎn)基因方式標記目標，信號標記一般是 GFP RFP HRP，直接用熒光染料標記的QDot較多
GFP 轉(zhuǎn)染技術(shù)相對成熟，GFP基因也容易獲??；缺點是發(fā)出的綠光波長較短 穿透力差 特別是脊椎動物的紅色素影響（肌紅蛋白 血紅蛋白） 成像往往很模糊 ，只能淺表成像
RFP 相對GFP優(yōu)勢明顯，波長廠，穿透力強，操作也不繁瑣，可以深度成像；但是，體外光源透射動物體，得到的往往是紅光，也就是說，信號和背景往往混合，讓結(jié)果不明顯
前兩種都是熒光蛋白（綠色、紅色）優(yōu)勢是成像處理簡單 ；缺點是成像時間不長（特別是GFP）信號隨曝光時間衰減，激發(fā)光越強 衰減越快。
HRP 不但波長適中，而且成像時間長，沒有信號衰減的煩惱；缺點是操作復(fù)雜，其顯像底物對動物有一定的毒性（注射底物后才能發(fā)光）
熒光染料直接標記，傳統(tǒng)的 Rhodamine、FITC 等使用很少，因為其效果與熒光蛋白差別不大，同樣有衰減（據(jù)稱 Alexa Fluor系列 衰減很少）
Qdot 成像操作與熒光蛋白相同，波長范圍廣，無衰減，可以多色標記，無毒性；缺點是無機染料，不能伴隨實驗動物一生，標記操作也復(fù)雜。
總體來說，2008年元月前體內(nèi)標記的方法就這幾種，至于近兩年有沒有新技術(shù)，不敢妄言。
二、成像儀方面
激發(fā)光源有 全波長激發(fā)和激光激發(fā)兩種：全波長可以一次性成像，但信號較弱，干擾也比較大；激光信號強，背景可以特征性去除，但成像較慢，多信號成像，成本偏高。
探頭一般是CCD 但是冷卻溫度不同--一般說來，溫度越低，背景信號少，可以探測若信號。也有CMOS探頭，成像效果更好，但專業(yè)CMOS價格高昂。
三、操作方法
假如實驗動物是哺乳動物，檢測前最好褪毛處理，毛發(fā)對光的吸收很強
輕度麻醉，防止動物活動或代謝過快
檢測時間短，重復(fù)性好
。。。具體事項很多，
總之，活體成像各個實驗都不一樣，成功與否取決于對整套方法的熟悉，敢于嘗試是關(guān)鍵。
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